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基于代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合智能感官探究臨床乳房炎對(duì)牛乳風(fēng)味的影響
發(fā)布日期:2024-08-29
        奶牛乳房炎是全世界奶牛業(yè)中最常見(jiàn)、治療最昂貴、造成損失最大的疾病之一,嚴(yán)重影響牛乳營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。臨床乳房炎在我國(guó)發(fā)病率高,更有不良商家在健康原料乳中摻雜乳房炎牛乳,不僅嚴(yán)重影響乳制品的風(fēng)味品質(zhì),更對(duì)消費(fèi)者的健康影響極大。代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)代謝物進(jìn)行定量分析并尋找代謝物與生理病理變化關(guān)系的一種新型研究方式。電子鼻和電子舌統(tǒng)稱智能感官,是一種模擬人類味覺(jué)和嗅覺(jué)的仿生儀器。
        本研究以健康牛乳與臨床乳房炎牛乳為研究對(duì)象,采用代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合智能感官比較樣品的風(fēng)味和滋味物質(zhì)差異,旨在為鑒別健康牛乳和臨床乳房炎牛乳提供數(shù)據(jù)支持,為原料乳質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù),進(jìn)而提高乳制品的風(fēng)味品質(zhì)。
        01 乳成分分析結(jié)果
        如表1和圖1所示,脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)、密度、蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)、冰點(diǎn)個(gè)指標(biāo)P值均小于0.05,具有顯著差異,與健康組相比,乳房炎組牛乳脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低P0.05)。脂肪在體細(xì)胞數(shù)量較多的牛乳中顯著下降,可能是由于乳房發(fā)炎期間乳腺細(xì)胞合成和分泌能力下降。乳房炎牛乳中蛋白質(zhì)含量增加,可能是由于奶牛患乳房炎后會(huì)增加乳房毛細(xì)血管的通透性,從而使蛋白含量增加。其余指標(biāo)在兩種牛乳間差異不顯著(P0.05)。
表1 乳房炎牛乳和健康乳成分含量及變化趨勢(shì)

圖1 顯著性差異指標(biāo)箱線圖
        02 電子鼻分析結(jié)果
        由圖2可知,電子鼻可以有效區(qū)分臨床乳房炎牛乳和健康牛乳樣品,PC1貢獻(xiàn)率達(dá)92.7%,可以很好地反映樣品的整體信息。電子鼻的18 個(gè)傳感器對(duì)兩種牛乳的風(fēng)味化合物皆有響應(yīng),并且響應(yīng)值各不相同。除LY2/LG傳感器響應(yīng)強(qiáng)度差異不顯著,其余17 個(gè)傳感器對(duì)兩種牛乳的響應(yīng)值均表現(xiàn)出顯著差異(P<0.05)。在健康牛乳中,T70/2、T40/2傳感器有顯著響應(yīng),對(duì)應(yīng)香氣增加。在乳房炎牛乳中,P30/1、LY2/gCT、P40/2、LY2/G等傳感器具有顯著響應(yīng),對(duì)應(yīng)的不愉快臭味增加。結(jié)合傳感器對(duì)應(yīng)參考化合物的風(fēng)味特征,由表2可知,奶?;既榉垦缀?,其分泌的乳汁不新鮮,存在一定的刺激性氣味,加工價(jià)值降低。
圖2 健康和乳房炎牛乳的電子鼻PCA得分圖(A)和載荷圖(B)
表2 不同傳感器對(duì)應(yīng)的參考化合物
        03 電子舌分析結(jié)果
        由圖3電子舌PCA圖可知,乳房炎組和健康組牛乳滋味不同,有明顯區(qū)分,PC1貢獻(xiàn)率為67%,所占權(quán)重大,PC2貢獻(xiàn)率為33%。所用傳感器包括CTS(咸)、NMS(鮮)、AHS(酸)、SCS(苦)、ANS(甜)5 個(gè)專一屬性和2 個(gè)綜合屬性(PKS、CPS)。健康牛乳中ANS傳感器有顯著響應(yīng),乳房炎牛乳中SCS傳感器響應(yīng)強(qiáng)度較高。其余傳感器探頭響應(yīng)強(qiáng)度有差異但不顯著。
圖3 健康和乳房炎牛乳的電子舌PCA得分圖(A)和載荷圖(B)
        04 H NMR分析結(jié)果
        如圖4所示,利用基于H NMR的代謝組學(xué)技術(shù)從牛乳樣本中共精確定性和定量54 種分子,主要為氨基酸、有機(jī)酸、碳水化合物、核苷、核苷酸及其衍生物等化合物。
圖4 乳房炎乳HNMR波譜圖
        乳酸、異亮氨酸、醋酸、亮氨酸、3-羥基丁酸、精氨酸、纈氨酸在乳房炎牛乳中含量較高,其中4 種屬于氨基酸類,其余3 種屬于有機(jī)酸類。研究表明,在臨床乳房炎牛乳樣中,游離氨基酸(異亮氨酸、亮氨酸、精氨酸、纈氨酸)含量明顯增加  。氨基酸含量顯著增加的原因可能是較高的病原特異性發(fā)酵和蛋白質(zhì)降解活性增強(qiáng) 。根據(jù)氨基酸的呈味特性與味覺(jué)強(qiáng)弱,將纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、精氨酸歸類于苦味氨基酸。因此,可以判斷乳房炎牛乳具有明顯的苦味。乳酸可以由牛乳中的微生物產(chǎn)生,也可以通過(guò)乳房炎癥后上皮細(xì)胞無(wú)氧呼吸產(chǎn)生。牛乳中的細(xì)菌會(huì)導(dǎo)致獨(dú)特的代謝圖譜,表現(xiàn)為乳酸含量升高。在本研究中,臨床乳房炎組的乳酸代謝水平顯著增加。醋酸是牛乳關(guān)鍵風(fēng)味成分,具有較強(qiáng)的酸味,在較高濃度下會(huì)產(chǎn)生異味。丁酸在低濃度時(shí)具有奶香味,而含量過(guò)高時(shí)就會(huì)呈現(xiàn)較強(qiáng)的酸臭味。
        與健康牛乳相比,乙酰肉堿、組氨酸、丙二酸鹽、二甲基砜、麥芽糖、胞嘧啶核苷、三甲胺氮氧化物、肌酸、膽堿、檸檬酸、延胡索酸酯、順烏頭酸、2-氧戊二酸鹽、肌酸酐、乳糖、甘氨酸在乳房炎牛乳中含量下降。這些分子主要參與能量和碳水化合物代謝、蛋白質(zhì)代謝。三羧酸循環(huán)是主要的代謝途徑,參與此代謝的化合物如檸檬酸、順烏頭酸、2-氧戊二酸鹽在乳房炎牛乳樣品中含量顯著減少。檸檬酸可與糖共同代謝,在酶的催化下經(jīng)多次轉(zhuǎn)化最終形成丙酮酸,而丙酮酸的消耗則可能會(huì)產(chǎn)生其他揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)。延胡索酸酯是三羧酸循環(huán)和尿素的中間產(chǎn)物。體細(xì)胞數(shù)量高的乳房炎牛乳中延胡索酸酯含量下降的原因可能是因?yàn)榧?xì)菌感染或酮癥導(dǎo)致三羧酸循環(huán)功能受損,影響能量代謝,從而引起延胡索酸酯從乳腺上皮分泌或泄漏到牛乳中。甘氨酸是結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的天然氨基酸,參與體內(nèi)多種代謝過(guò)程,是肝臟中合成肌酸的主要氨基酸。肌酸大部分以磷酸肌酸的形式存在于肌肉中,參與能量代謝。乳糖是牛乳中一種重要的碳水化合物,當(dāng)奶?;寂R床乳房炎后,乳腺細(xì)胞膜被破壞,血液成分流入牛乳中。為維持滲透壓穩(wěn)定,乳糖含量下降。肉堿是機(jī)體內(nèi)一種氨基酸衍生物,參與體內(nèi)骨骼肌能量代謝、脂代謝、糖代謝等過(guò)程。肉堿在中間代謝的主要功能是將長(zhǎng)鏈脂肪酸從細(xì)胞質(zhì)運(yùn)輸?shù)骄€粒體基,其前體物質(zhì)是賴氨酸和甲硫氨酸,因此肉堿的缺乏會(huì)導(dǎo)致氨基酸代謝譜異常。肉堿在臨床乳房炎牛乳中含量下降的原因可能是能量代謝受損。
        04 結(jié)論
        利用基于H NMR的代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合智能感官、乳成分分析儀,探究臨床乳房炎對(duì)牛乳理化特性、風(fēng)味和滋味物質(zhì)的影響。結(jié)果表明,電子鼻和電子舌能夠成功區(qū)分健康牛乳和乳房炎牛乳氣味和滋味的差異。采用H NMR技術(shù)對(duì)健康牛乳和乳房炎牛乳的小分子物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定,共分析鑒定出54 種化合物,其中23 種分子含量在兩組牛乳樣本中差異顯著。具體表現(xiàn)為乳房炎牛乳中氨基酸和有機(jī)酸的含量明顯增加,導(dǎo)致乳制品產(chǎn)生不愉悅的酸臭味。本研究為鑒別健康牛乳和臨床乳房炎牛乳提供數(shù)據(jù)支持,為原料乳質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù),有助于提高乳制品的風(fēng)味品質(zhì)。

參考文獻(xiàn):盧璇,張茜,趙宇軒,等.基于代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合智能感官探究臨床乳房炎對(duì)牛乳風(fēng)味和滋味物質(zhì)的影響[J].食品科學(xué),2023,44(20):260-267.
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